Traj18基因敲除免疫缺陷小鼠模型
討論與結(jié)論
該品系可用于NKT細胞相關(guān)的多種疾病及發(fā)育相關(guān)研究。
生物安全性
動物模型的制備和應用實驗必須在具備相應資質(zhì)的實驗室開展。動物模型的制備、應用過程中的監(jiān)督管理、處置措施、對環(huán)境和生態(tài)影響等應符合國家相關(guān)法律規(guī)定。
評價驗證
通過流式細胞儀對敲除小鼠的胸腺、脾臟和肝臟的NKT細胞進行了分析，包括B220、CD3ξ，CD4，CD8α，TCRβ，相關(guān)的標記購買自BD公司。為驗證該基因?qū)δ[瘤的抵抗作用，選取肝臟轉(zhuǎn)移的B16黑色素瘤，對小鼠進行靜脈注射，同時選擇αGalCer-DC細胞注射作為另一實驗組。
流式細胞儀分析，Traj18基因敲除小鼠的NKT細胞在胸腺、脾臟和肝臟都沒有表達：
接種腫瘤實驗表明，該敲除小鼠對腫瘤的耐受能力下降:
制備方法
背景小鼠：C57BL/6J
構(gòu)建信息：應用CRISPR/Cas介導的基因組工程技術(shù)建立 Traj18基因敲除小鼠模型；小鼠Traj18基因(Gene ID: 100124371)位于小鼠14號染色體上，小鼠的Traj18基因為目的位點：
將構(gòu)建兩對gRNA靶向載體，并經(jīng)測序證實。體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的Cas9mRNA和gRNA將被共同注射到受精卵中，以促進KO小鼠的產(chǎn)生。用PCR進行仔鼠基因分型，然后進行序列分析；將Traj18基因的gRNA和Cas9mRNA共注射到受精卵中，以產(chǎn)生有針對性的敲除后代。通過PCR鑒定F0代首建鼠，隨后進行序列分析，然后與野生型小鼠繁殖獲得F1代，再進行鑒定，F(xiàn)1代再進行繁殖，最終獲得純合子小鼠。PCR反應體系及條件為
研究背景
天然殺傷T細胞（NKT）是T淋巴細胞的一個獨特的子集，它通過細胞因子的快速釋放和與免疫系統(tǒng)其它細胞直接作用來調(diào)節(jié)免疫反應。因此NKT細胞作為先天和適應性免疫系統(tǒng)之間的重要聯(lián)系，是免疫療法的有前景的靶點。I型NKT細胞，也稱iNKT細胞，是小鼠中最常見的NKT細胞，在人類中具有相似的特性。
TRAJ18基因與TRAv11基因結(jié)合，形成具有適當抗原特異性的iNKT細胞受體（Tcr）。有報道指出敲除TRAJ18基因的小鼠，約60%的TCRα多樣性缺乏。
參考文獻：
1. Lower TCR repertoire diversityin Traj18-deficient mice.
2. Generation of NovelTraj18-Deficient Mice Lacking Vα14 Natural Killer T Cells with an Undisturbed TCell Receptor α-Chain Repertoire.
3. Mutation of the Traj18 genesegment using TALENs to generate Natural Killer T cell deficient mice.
模型信息
中文名稱:Traj18基因敲除免疫缺陷小鼠模型
英文名稱:traj18 knock out, immune deficiency mice model
分級:NA
用途:用于自然殺傷T細胞相關(guān)疾病研究、發(fā)育研究等。
研制單位:北京華阜康生物科技股份有限公司
保存單位:北京華阜康生物科技股份有限公司
